基因过表白
工具载体介绍
| 表白系统 | 真核表白载体 | 慢病毒载体 | 沉组腺有关病毒载体 | 沉组腺病毒载体 |
|---|---|---|---|---|
| 载体基因个性 | 双链DNA质粒 | RNA逆转录病毒 | 单链DNA病毒 | 双链DNA病毒 |
| 表源基因表白功夫 | 24h起头表白 ，持续3-7天 | 2-4天起头表白 ，长功夫不变表白 | 7-14天起头表白 | 1-2天起头表白 |
| 插入片段大幼 | 8kb左右 | 4kb左右 | 2.8kb左右 | 6kb左右 |
| 不变细胞株筛选 | 难操作 | 能够 | 不成以 | 不成以 ，瞬时表白 |
| 细胞尝试 | 细胞系 ，部门转染效能低 | 首选 ，广谱 ，习染效能高 | 不适合 | 广谱 ，习染效能高 |
| 动物尝试 | 不适合 | 适合 ，凭据观察功夫和注射部位 | 首选 ，凭据观察功夫和注射部位 | 免疫原性高 ，慎选 |
| 滴度领域 | 无 | 108~109TU/ml | 1012-1013vg/ml | 1010-1011pfu/ml |
载体图谱中常见元件介绍
| 元件名称 | 类型 | 用处 |
|---|---|---|
| 启动子 | CMV、CAG、EF1a、U6等 | 广谱或特异启动主张基因的表白 |
| hSyn、CaMKIIα等 | 特异性启动子 ，在特定的组织细胞中启动主张基因的表白 | |
| 蛋白标签 | 3xFLAG、HA 、6xHis、Myc等 | 与主张基因融合表白 ，常用于检测表源蛋白表白水平 |
|
荧光象征 |
EGFP、mCherry、mNeonGreen等 |
可与主张基因融合或非融合表白用于检测转染、习染成效 |
| 抗性基因 |
Puro、Neo、Hygro、BSD等 |
真核抗性 ，常用于不变株筛选 |
|
Amp、Kan |
原核抗性 ，常用于原核细菌造就 ，质粒扩增 |
|
| 衔接元件 |
Linker |
用于衔接两个基因 ，融合表白时常用 ，可降低因融合表白对蛋白折叠和职能的影响 |
| IRES、2A |
用于衔接两个基因 ，达到非融合表白的成效 |
|
| 其它元件 | WPRE | 增长主张基因的表白 |
载体选择（部门）
| 载体类别 | 编号 | 载体元件 |
|---|---|---|
| 慢病毒过表白 |
GL127 |
pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-WPRE |
| GL121 |
pSLenti-EF1-EGFP-CMV-MCS-WPRE |
|
| GL107 |
pSLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE |
|
|
GL122 |
pSLenti-EF1-EGFP-F2A-BSR-CMV-MCS-WPRE |
|
|
GL124 |
pSLenti-EF1-Luc2-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE |
|
| 腺病毒过表白 | H225 |
pADV-mCMV-MCS-3xFLAG |
| H201 |
pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG |
|
| H213 |
pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP |
|
|
H204 |
pADV-mCMV-mCherry-HA |
|
| 腺有关病毒过表白 | AOV024 |
pAAV-CMV-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE |
| AOV025 |
pAAV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE |
|
| AOV064 |
pAAV-hSyn-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE |
|
| AOV065 |
AAV-hSyn-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE |
|
| H9429 |
pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA |
|
| H9525 |
pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA |
|
| H10881 |
pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA |
|
| H10886 |
pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA |
服务简介
病毒载体服务流程
有关技术服务
基因滋扰
CRISPR/Cas9
内源性转录激活/抑造
