全国服务热线400-151-5198 业务征询15800353038
表泌体（Exosomes）是细胞排泄到胞表的一种囊泡（Extracellular Vesicles，EVs），其大幼为30-150nm，拥有双层膜结构和茶托状状态，含有丰硕的内含物（蕴含核酸、蛋白和脂质等），参加细胞间的分子传递。表泌体宽泛存在于细胞造就上清以及各类体液中，蕴含血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等，同时也存在于组织样本中，如脑组织、肌肉组织、脂肪组织等。
脑组织分离步骤简述：将脑组织剪成薄片，放入离心管中加上消化液进行消化，经水浴、反复轻轻高低颠倒，再用移液枪间断缓慢吹吸至消化实现。随后参与造就基于消化液中，混匀，置于冰上。再进行一系列的差速超速离心过程，蕴含除杂、滤膜过滤、超离等。最后用PBS沉悬表泌体，用沉悬后的表泌体进行下面的透射电镜（TEM）、纳米粒径跟踪分子（NTA）和marker WB鉴定。
图一 胞表囊泡排泄
所有的细胞都能排泄表泌体，但是分歧细胞排泄的表泌体不论在数量上还是在内含物中都拥有很大的差距性，这也决定了每种表泌体所行使的职能不一样。表泌体宽泛参加细胞间物质运输与信息传递，调控细胞生理活动。同时，表泌体拥有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、推进肿瘤发生和转移等作用；此表，表泌体还能够作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。
表泌体有关数据库有哪些？
l exoRBase数据库网络和描述人类血液表泌体中所有长的RNA，蕴含circRNA、lncRNA和mRNA。
l EVpedia和Vesiclepedia数据库汇总了分歧囊泡钻研中发现的蛋白、mRNA、miRNA、脂类等信息。
l ExoCarta数据库重要收录了蕴含人、大鼠、幼鼠、绵羊等几个物种的286个钻研了局，涉及蛋白、mRNA、miRNA、脂类等信息。
样本预处置与表泌体分离、保留：
表泌体存在于人类或动物的各类体液中，我们能够选择分歧的样正本源进行有关的表泌体钻研。由于表泌体是起源于细胞质膜内陷的含有脂质双分子层膜结构的多泡幼体，散布于胞表基质。为了获得高纯度的表泌体，必须确保有效去除所有的细胞碎片及其他不必要的杂质。
1） 细胞造就上清 2）血浆/血清
3）尿液 4）脑脊液
5）卵泡液 6）宫腔液
7）胆汁 8）羊水
9）腹水 10）胸腔液
分歧的尝试样本采集时必要把稳的处所不一样，如细胞造就上清在网络样本前需换成无表泌体血清造就、血浆样本采集时用肯定不能用肝素抗凝管、尿液网络时必要加抑菌剂等。
从生物体液中分离表泌体的各类步骤已经被开发出来，重要凭据表泌体的大幼、密度、免疫个性等特点进行操作。分离出高纯度的表泌体是我们后续发展表泌体钻研的关键步骤，目前差速超速离心是表泌体分离步骤中公认的“金尺度”，也是高分文章中首选的分离步骤。
表泌体提取在短功夫（一周之内）使用，能够放在4度保留，若是长功夫保留能够放在-20度或-80度保留。也能够将表泌体进行分装，别离放在-20度或-80度。
表泌体检测步骤：
表泌体分离之后，必要经过一系列鉴定能力确定分离的是表泌体。鉴定步骤从物理特点到表表分子标志物，多角度进行鉴定。
l 透射电镜鉴定法：简称TEM，适合表泌体双层囊膜超微结构观察，即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。
图二 透射电镜
l 纳米颗粒跟踪分析法：简称NTA，该步骤能保障表泌体原始状态、检测速度快，检测后能提供表泌体粒径和浓度信息。
图三 NTA
l Western blot分子标志物检测：表泌体标志蛋白蕴含四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；细胞质蛋白，如肌动蛋白（Actin）和钙磷脂结合蛋白（Annexins）；参加生物职能的分子，如凋亡转接基因2互作蛋白X（ALIX）、肿瘤易感基因101蛋白（TSG101）、热休克蛋白（HSP70、HSP90），以及细胞排泄的特异性蛋白。
图四 Western Blot（Tian Su et al., ACS Nano. 2019）
表泌体高通量检测
表泌体内含有与细胞起源有关的蛋白质和核酸，能够运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等进入受体细胞，参加细胞间通讯。分歧细胞起源的表泌体所含有的蛋白成分和RNA不太一样，可作为多种疾病的早期诊断象征物，也能作为靶向药物的载体进行疾病医治。
1. miRNA高通量测序
2. mRNA高通量测序
3. lncRNA芯片（人、幼鼠）
4. ceRNA芯片（人、幼鼠）
5. 蛋白质组分析（iTRAQ、TMT、Label-free）
表泌体象征或示踪：
l 亲脂染料象征表泌体：目前已颁发的表泌体文章中，表泌体大多使用亲脂性染料进行象征，体内和体表都有较多利用。亲脂性染料重要分为两大类，第一类是PKH67（绿色荧光）/PKH26（红色荧光），由于它们能够与表泌体的脂质双层膜不变结合，所以染色成效较好，利用较宽泛。
图五 PKH67象征的表泌体与神经元之间相互作用（Juan Carlos Polanco et al., Acta Neuropathol Commun. 2018）
图六 PKH26象征的表泌体与MDA‐MB‐231细胞共造就（Mengyu Yu et al., Cancer Sci. 2019）
第二类是Di系列的亲脂性染料，蕴含DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光）。其中DiR的红表荧光可穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。
图七 DiI象征的表泌体通过静脉注射观察在体内器官的散布情况（Laura Otero-Ortega et al., J Cereb Blood Flow Metab. 2018）
l 慢病毒介导CD63-GFP表白：将表泌体的特定蛋白CD63和绿色荧光蛋白GFP的表白元件构建成质粒再包装到慢病毒中，随后用此慢病毒习染细胞，使细胞排泄的表泌体带有绿色荧光。
图八 用GFP象征的表泌体别离与SH-SY5Y、BV2和DRG细胞共造就（Rui Ren et al., Artif Cells Nanomed Biotechnol. 2019）
图九 注射有CD63-GFP的表泌体后观察第1天(D1)和第5天(D2)的荧光（Rui Ren et al., Artif Cells Nanomed Biotechnol. 2019）
表泌体职能钻研：
将象征的表泌体参与受体细胞造就基中，与受体细胞进行共造就，观察细胞的职能变动，如细胞增殖、迁徙与侵袭、细胞凋亡等；或者将表泌体注射入动物模型中，观察动物表型变动和检测动物有关指标。
图十 DiR象征的表泌体静脉注射幼鼠结肠癌肿瘤模型（Gaofeng Liang et al., J Nanobiotechnology. 2020）
图十一 表泌体的职能钻研（Tian Fang et al., Nat Commun. 2018）
优德88优势：
1) 尝试周期短；
2) 价值优惠；
3) 完善的售后服务；
4) 项目经验丰硕，成功率险些100%；
5) 齐全的一套尝试服务。
我们提供的服务：
1) 差速超速离心分离；
2) 透射电镜拍摄（TEM）；
3) 纳米粒径跟踪分析（NTA）；
4) Western Blot检测蛋白标志物；
5) 表泌体高通量测序/芯片；
6) 表泌体象征或示踪；
7) 表泌体细胞职能检测；
8) 表泌体动物注射；
9) 表泌体动物模型验证等。 
