不变细胞株构建

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表源基因在细胞中的表白可分为两大类，一类是瞬时表白，表源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，固然能够达到高水平的表白，但通常只持续几天；一类是不变表白（构建稳转株），表源DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可持久表白主张基因。

成立不变细胞株，根基道理是将表源DNA克隆到拥有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表白载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，筛选得到可不变表白主张蛋白、或不变寡言特定基因的细胞株。

筛选步骤

慢病毒习染筛选不变细胞株
利用慢病毒整合表白个性来筛选不变细胞株，该步骤克服了传统质粒挑单克隆步骤周期久的短处，能够在短功夫内高效获取不变细胞株。

利用慢病毒造备不变株优势
（1）细胞合用种类宽泛，可用于各类哺乳动物细胞；
（2）构建稳转株功夫短，表白持续功夫长；
（3）多种荧光象征和抗性基因可选，满足观测尝试要求。

HUVEC

HepG2

不变细胞株分类

混合克隆不变细胞株

混合克隆细胞系是基因转染后直接用抗药筛选得到的，筛选出的细胞都表白抗性基因和主张基因，但蕴含了各类分歧的细胞克隆。分歧克隆的主张基因整合地位和表白量均有所分歧。

混合克隆细胞株筛选比力急剧，用度较低。在必要构建的细胞株转染效能高，主张基因表白效能高的情况下，单克隆细胞株最后得到的表白成效和混合克隆细胞株并没有显著差距，这时多克隆细胞筛选是梦想的选择。

单克隆不变细胞株

单克隆细胞系是由含有不变整合表源片段的单个细胞的扩增得到的细胞株，每个细胞的主张基因整合地位的表白量均高度一致，但可能迷失一些表型。单克隆细胞株筛选周期长，用度高。必要进行细胞亚定位尝试的细胞系，难习染的和表白率低的通常建议进行单克隆细胞筛选。

服务流程

主张基因名称，种属等信息
载体需要（抗性、荧光、便签等）
主张细胞等信息
其它特殊需要
细胞预尝试
质粒构建表白检测
慢病毒包装与纯化
不变株筛选及鉴定
构建好的不变株
不变株构建说明书
构建的质粒，病毒等

已构建的不变株列表（部门）

中文名称	对应不变株	对应造就前提	细胞起源
人脑星形胶质母细胞瘤	U-87 MG-luc-mNeonGreen-Puro	MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人胶质瘤细胞	U251-CMV-EGFP-Puro	DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人膀胱移行细胞癌细胞	T24-EGFP-Puro	RPMI-1640+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人胰腺癌细胞系	SW 1990-EGFP-Puro	L-15+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人神经母细胞瘤细胞	SK-N-SH-EGFP-Puro	MEM+10%FBS+0.4ug/ml Puromycin	中科院
人乳腺癌细胞	SK-BR-3-EGFP-Puro	DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人子宫颈鳞癌细胞	SiHa-CMV-EGFP-Puro	DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
幼鼠脑神经瘤细胞	Neuro-2a-EGFP-Puro	MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
幼鼠脑神经瘤细胞	Neuro-2a-CMV-Puro	MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人乳腺癌细胞	MDA-MB-468-EGFP-Puro	L-15+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人乳腺癌细胞	MDA-MB-231-CMV-EGFP-Luc-Puro	L-15+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人乳腺癌细胞	MCF7-CMV-EGFP-Puro	MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
幼鼠肺癌细胞	LLC-CMV-sfGFP-Luc-Puro	DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人慢性髓原白血病细胞	K-562-CMV-EGFP-Puro	RPMI-1640+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人T淋巴细胞白血病细胞	Jurkat-CMV-EGFP-Puro	RPMI-1640+10%FBS+0.5ug/ml Puromycin	中科院
人子宫内膜癌细胞	ishikawa-CMV-Puro	RPMI-1640+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人肝癌细胞	HuH-7-CMV-sfGFP-Luc-Puro	DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人肝癌细胞	HuH-7-Luc Puro	DMEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人结肠癌细胞	HT-29-EGFP-Puro	McCoy’s 5A+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人肝癌细胞	Hep G2-CMV-EGFP-Luc-Puro	DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人肝癌细胞	Hep G2-CMV-Puro	DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人宫颈癌细胞	HeLa-EGFP-Puro	DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人宫颈癌细胞	HeLa-RFP-Puro	DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人结肠癌细胞	HCT 116-CMV-EGFP-Luc-Puro	McCoy’s 5A+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人咽鳞癌细胞	FaDu-CMV-EGFP-Puro	MEM+10%FBS+1ug/ml Puromycin	中科院
幼鼠结肠癌细胞	CT26.WT-CMV-Luc-Puro	RPMI-1640+10%FBS+8ug/ml Puromycin	中科院
幼鼠结肠癌细胞	CT26.WT-CMV-Puro	RPMI-1640+10%FBS+8ug/ml Puromycin	中科院
人肾通明细胞癌皮肤转移细胞	Caki-1-EGFP-Puro	DMEM+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
仓鼠肾成纤维细胞	BHK-21 [C-13]-CMV-Puro	MEM+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人甲状腺乳头状癌细胞	B-CPAP-CMV-EGFP-Puro	RPMI-1640+10%FBS+1%NEAA+2ug/ml Puromycin	中科院
幼鼠玄色素瘤细胞	B16-CMV-Puro	RPMI-1640+10%FBS+1ug/ml Puromycin	中科院
幼鼠玄色素瘤细胞	B16-CMV-EGFP-Puro	RPMI-1640+10%FBS+1ug/ml Puromycin	中科院
人非幼细胞肺癌细胞	A549-CMV-EGFP-Puro	F12K+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人非幼细胞肺癌细胞	A549-luc-mNeonGreen-Puro	F12K+10% FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
幼鼠乳腺癌细胞	4T1-CMV-Luc-Puro	RPMI-1640+10%FBS+1ug/ml Puromycin	中科院
幼鼠乳腺癌细胞	4T1-CMV-EGFP-Puro	RPMI-1640+10%FBS+1ug/ml Puromycin	中科院
人胃癌细胞	MKN-45-CBh-luc2-mNeonGreenA-Puro	RPMI-1640+20%FBS+2ug/ml Puromycin	协和
人肺腺癌细胞	NCI-H1975-CBh-luc2-mNeonGreenA-Puro	RPMI-1640+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院
人结肠癌细胞	HCT116-CBh-luc2-mNeonGreenA-Puro	McCoy’s 5A+10%FBS+2ug/ml Puromycin	中科院

有关技术服务

细胞增殖
细胞凋亡
侵袭和迁徙
细胞周期
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