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萤光素酶是梦想的汇报基因,由于哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶,一旦转录实现立刻就生成功能性的萤光素酶。单汇报基因尝试往往会受到各类尝试前提的影响,而双汇报基因则通过共转染的“对照”作为内参为试验提供一基准线,从而能够在最大水平上减幼细胞活性和转染效能等表在成分对尝试的影响,使得数据了局更为可信。Dual-Luciferase®双萤光素酶汇报基因检测系统在细胞中同时表白萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶,两者没有种源同源性并对应分歧的反映底物,故而没有交叉滋扰。得益于超强的光信号和超高的信噪比。
miRNA靶基因验证
miRNA重要通过作用于靶基因的3’UTR起作用(降解或抑造翻译),将主张基因3’UTR(野生型和结合位点突变型)序列构建至载体中汇报基因F-Luc的3’端,通过比力过表白miRNA后,汇报基因表白的扭转(萤光素酶的活性降落还是不变),来确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点。
主张:验证 miRNA与靶基因3’UTR 是否发生调控作用。
资料:质粒pMIR-REPORT Luciferase基因3'UTR(Wt);pMIR-REPORT
Luciferase-基因3'UTR(Mut);pRL-CMV(H321,Promega);293T细胞株
步骤:靶点预测——构建质粒——转染细胞检测——汇报基因检测(Luciferase活性检测)——统计分析
了局展示:

启动子活性钻研
转录因子是一种拥有特殊结构、行使调控基因表白职能的蛋白质分子,也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合,这些特异性的序列被称为顺式因子,转录因子的DNA结合域和顺式因子实现共价结合,从而对基因的表白起抑造或加强的作用。
转录因子重要通过作用于靶基因的启动子起作用,将主张基因启动子区序列代替汇报基因F-Luc的启动子,通过共表白转录因子后,汇报基因表白的扭转,来确定转录因子与靶基因启动子结合位点及对靶基因的作用。
主张:检测转录因子对主张基因启动子活性的影响
资料:尝试质粒(pGL4.10-基因promotor);对照质粒; pRL-CMV(E2261,Promega);转录因子质粒;293T细胞株
步骤:靶点预测——构建质粒——转染细胞检测——汇报基因检测(Luciferase活性检测)——统计分析
了局展示:

客户需提供信息:
1 靶基因名称
2 靶基因种属
3 调控因子(miRNA或者转录因子)名称
提供给客户:
1 结合位点预测了局
2 质粒及其构建汇报
3 双荧光素酶检测汇报