AAV包装过程中，包装质粒掌管编码主张基因以及两个结尾反向沉复序列（ITR，对于病毒的复造和包装拥有决定性作用），辅助质粒蕴含AAV包装所需的cap（编码病毒衣壳蛋白）和rep（参加病毒的复造）基因，以及腺病毒Helper质粒。三种质粒共同转染293T细胞后，AAV病毒起头复造和包装。优德88生物腺有关病毒的出产和质控采取了国际学术界公认的尺度流程，选取三质粒系统在293T细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速离心纯化，并通过qPCR对病毒基因拷贝进行滴定。另表，我们也能够凭据使用者要求，提供蛋白染色检测衣壳蛋白的齐全性以及内毒素含量等。通常情况下rAAV的滴度在10
滴度检测步骤：定量PCR检测病毒基因组中表源DNA拷贝数。
滴度检测道理：腺有关病毒的基因组为单链DNA，表源DNA拷贝数代表病毒基因组拷贝数。
rAAV侵染细胞过程
纯化后的AAV病毒载体能够用于侵染细胞，侵染细胞时，AAV与细胞表表特异性受体结合，激活胞内信号通路，进而触发AAV通过受体介导的内吞作用进入细胞，在核内体、高尔基体等细胞器的协助下进入细胞核，随后病毒裂解，其单链DNA需复造成为双链DNA后表白主张基因。
rAAV作用机造
rAAV载体优势 1、安全性高、免疫原性低：AAV是一种复造缺点型DNA病毒，无自主复造能力，野生型AAV依赖rep基因进行低频定点整合，rAAV不整合。目前尚无由AAV引起的人类及哺乳动物疾病报路，也是FDA核准上市的基因医治药物中最安全的病毒载体之一。
2、宿主细胞领域广：AAV拥有宽泛的宿主领域，对割裂细胞和非割裂细胞均拥有习染能力。
3、扩散能力强：AAV直径约20-26nm，体积幼，滴度高，拥有优良的扩散能力，其中AAV-PHP.eB和AAV9拥有跨血脑樊篱的能力，在神经科学领域利用宽泛。
4、体内表白基因功夫长：AAV拥有维持持久基因转录表白能力，体内表白通常3周能够达到顶峰，随后持续高表白，作用功夫＞5个月。
5、种类多样：AAV血清型众多，此表，凭据分歧的尝试设计，我们还在不休的突变，筛选新的血清型（AAV1-13，AAV2/1, 2/2, 2/5, 2/6, 2/8, 2/9, DJ; retro, PHP.eB…）。
分歧病毒的生物学个性比力
基于上述特点，AAV被视为是一种高效和安全的体表及体内基因转导工具。尤其在整体水平钻研中，与其他常用病毒工具载体相比，AAV拥有习染过程和善长效的表白能力，是基因操作的利器。
rAAV血清型选择
目前已注册的AAV种类总数已超过196种，灵长类动物体内有13种分歧血清型的AAV（即AAV1-AAV13），其中AAV2、AAV3、AAV9源自人类自身，值妥贴心的是，AAV2是最早被克隆的病毒，也是迄今钻研最为彻底、利用最为宽泛的病毒载体。随着钻研的不休深刻，钻研人员发现分歧血清型的AAV之间能够杂交，而杂交后的AAV会兼有杂合双方的特点，因而，AAV亚型顺势诞生。
此刻钻研中常用的rAAV就是利用AAV2型基因组与分歧的衣壳蛋白结合产生的混合体病毒载体，通常象征为rAAV2/N
(N为分歧的衣壳血清型)。沉组的病毒拥有AAV2型的不变表白和基因整合能力，同时获得了分歧血清型的组织习染嗜亲性（分歧血清型衣壳表表的特定结构位点决定了各自受体的特异性），阐发出肯定的器官靶向特异性。
分歧血清型AAV的组织嗜亲性
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血清型 |
组织亲和性 |
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rAAV2/1 |
神经系统（高滴度顺向跨突触），肌肉，骨骼肌，心肌，滑润肌 |
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rAAV2/2 |
视网膜、神经系统，肌肉，肝脏，血管滑润肌 |
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rAAV2/3 |
肌肉，肝脏，肺，眼 |
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rAAV2/4 |
神经系统，肌肉，眼，脑 |
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rAAV2/5 |
神经系统，肺，视网膜，肝脏，滑膜关节 |
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rAAV2/6 |
神经系统，肺，肌肉，心脏 |
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rAAV2/7 |
肌肉，肝脏 |
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rAAV2/8 |
神经系统，肝脏，肌肉，脂肪组织，胰腺，视网膜， |
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rAAV2/9 |
神经系统，心肌，肺，视网膜，皮肤 |
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rAAV2-retro |
神经系统（逆向非跨突触） |
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AAV-PHP.eB |
跨血脑樊篱（静脉注射） |
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AAV-PHP.S |
全表周神经（尾静脉注射） |
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AAV-PAN |
胰腺（腹腔注射） |
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AAV-LUNG |
肺（尾静脉注射） |
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AAV-DJ |
视网膜，肺，肾脏，体表习染细胞 |
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AAV-7m8 |
视网膜 |
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AAV-ShH10Y |
视网膜Muller细胞 |
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AAV-Rh10 |
肝脏，血液，心脏，体表习染细胞 |
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AAV-Anc80L65 |
内耳、视网膜、骨骼肌、肝脏 |
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AAV-SCH9 |
SVZ区神经干细胞 |
幼建议：如您不确定选择哪种血清型，可尝试使用优德88生物Pandora’s Virus
（AAV多种血清型）进行预尝试，通过比力分歧血清型对指标组织的习染成效，摸索最佳尝试前提（注射步骤、注射位点、病毒用量等），以便得到更梦想的尝试了局。
Pandora’s
Virus 详情：
rAAV载体利用案例 1、在神经科学领域中的利用
1.1 表侧缰核&光遗传学
客户颁发文章：Nature. (IF=41.577). Yang Y,et.al. (2018). Ketamine blocks bursting in the lateral habenula to rapidly
relieve depression. [腺有关病毒, 抑郁症, 光遗传]
注射部位：幼鼠LHb
载体：AAV2/9-hSyn-oChIEF-tdTomato
血清型：AAV2/9
病毒滴度：6.29E+12 VG/mL
注射体积：100nl
观察功夫：1个月
1.2 臂旁核&化学遗传学
客户颁发文章：Science. (IF=41.058). Mu D,et.al. (2017).
A central neural circuit for itch sensation. [腺有关病毒, 痒, 光遗传,化学遗传]
注射部位：幼鼠PBN
载体：AAV-hSyn-HA-hM4Di-IRES-mCitrine
血清型：AAV2/9
病毒滴度：1E+13
VG/mL
注射体积：150nl
观察功夫：3周
1.3 丘脑&钙离子成像
客户颁发文章：客户颁发文章：Science. (IF=41.058). Ren
S,et.al. (2018). The paraventricular thalamus is a critical thalamic area for wakefulness. [腺有关病毒, 醒觉]
注射部位：幼鼠PVT
载体：AAV-CaMKIIα-GCaMP6f
注射体积：100nl
观察功夫：4周
1.4
丘脑室旁核&杀死神经元
客户颁发文章：Science. (IF=41.058). Ren S,et.al. (2018). The paraventricular thalamus is a
critical thalamic area for wakefulness. [腺有关病毒, 醒觉]
注射部位：幼鼠PVT
载体：AAV-CaMKIIα-Cre-GFP &AAV-DIO-caspase-3
注射体积：两支病毒1:1混合注射100nl
观察功夫：4周
1.5 海马、皮层&逆向非跨突触（rAAV2/retro）
客户颁发文章：Biological
Psychiatry. (IF=11.984). Bing Xing Pan,et.al. (2018). Chronic stress causes projection-specific adaptation of
amygdala neurons via SK channel downregulation. [腺有关病毒, 焦虑症, 光遗传]
注射部位：幼鼠dmPFC、VHPC
载体：AAV2/1-retro-Syn-eYFP-Cre、AAV2/8-CaMKIIα-DO-SK2&AAV2/8-CaMKIIα-DIO-SK2-mCherry
注射体积：300nl
观察功夫：4周
1.6 低级活动皮层&顺向跨突触（rAAV2/1）
Nature Neuroscience. (IF=19.912). Yao J,et.al. (2018).
A corticopontine circuit for initiation of urination. [腺有关病毒, 神经环路]
注射部位：幼鼠皮层M1、PMC
载体：rAAV2/1-hSyn-Cre&rAAV2/9-DIO-hChR2(H134R)-mCherry、rAAV2/9-DIO-GCaMP6s
病毒滴度：rAAV2/1: 5E+12
VG/mL；rAAV2/9-DIO-hChR2：1.2E+13 VG/mL；rAAV2/9-DIO-GCaMP6s：1E+12 VG/mL
注射体积：多点注射，每位点30-40nl
观察功夫：4周
1.7 边缘前皮质&跨突触示踪（WGA-Cre）
客户颁发文章：Science Advances. (IF=11.511). Ping Zheng,et.al.
(2019). Crucial role of feedback signals from prelimbic cortex to basolateral amygdala in the retrieval of
morphine withdrawal memory. [腺有关病毒, 成瘾, AAV1, AAV-WGA-Cre]
注射部位：幼鼠PrL
载体：AAV-hSyn-mCherry-IRES-WGA-Cre
病毒滴度：4.28E+12 VG/mL
注射体积：300nl
观察功夫：4周
1.8 皮层&AAV滋扰（AAV-shRNA）
客户颁发文章：Nature Medicine. (IF=22.864). Cao
X,et.al. (2013). Astrocyte-derived ATP modulates depressive-like behaviors.[腺有关病毒, 抑郁症]
注射部位：幼鼠mPFC
载体：AAV-CMV-P2rx2 shRNA-EGFP
病毒滴度：3E+12 VG/mL
注射体积：1.5ul
观察功夫：2周
1.9 全脑表白&跨血脑樊篱（AAV-PHP.eB）
载体信息：pAAV-PTRE-tight-NLS-Cre（108-109VG/mL）、pAAV-EF1a-DIO(tTA-P2A-mScarlet)-WPRE（1012VG/mL）
1.11在视网膜中的利用
优德88生物—玻璃体腔注射
病毒载体：AAV-syn-GcaMP6s
2、在其他脏器中的利用
2.1 rAAV习染肝脏
优德88生物—rAAV2/8尾静脉注射习染肝脏事俘
病毒总量：1E+11VG
注射体积：200ul
病毒表白功夫：周围
2.2 rAAV习染心脏
优德88生物—rAAV2/9尾静脉注射习染心脏事俘
病毒总量：2E+11VG
注射体积：200ul
病毒表白功夫：周围
2.3 rAAV习染肺部
优德88生物—rAAV-Lung尾静脉注射习染肺部事俘
病毒总量：5E+11VG
注射体积：200ul
病毒表白功夫：二周
客户颁发文章：Cell.
(IF=36.216). Huijuan Wu,et.al. (2020). Progressive Pulmonary Fibrosis Is Caused by Elevated Mechanical
Tension on Alveolar Stem Cells. [腺有关病毒, 滋扰]
注射方式：气管注射
习染部位：肺部
载体：pAAV-Tgfb1 shRNA
血清型：rAAV2/9
病毒注射量：1E+11 VG（50ul）
观察功夫：3周
2.4 rAAV习染肾脏
优德88生物—rAAV2/8尾静脉注射习染肾脏事俘
病毒总量：2E+11VG
注射体积：200ul
病毒表白功夫：周围
2.5 rAAV习染脂肪组织
优德88生物—rAAV2/8腹股沟脂肪多点注射习染脂肪事俘
病毒总量：4E+10VG/侧
病毒表白功夫：周围
2.6 rAAV习染肌肉组织
优德88生物—rAAV2/8后腿肌肉多点注射习染肌肉事俘
病毒总量：4E+10/侧
病毒表白功夫：周围
2.7 rAAV习染胰腺
优德88生物—rAAV-PAN腹腔注射胰腺事俘
病毒总量：4E+11VG
表白检测功夫：4周
