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基础研发目前的重要钻研方向为慢病毒(LV)载体刷新、腺病毒(ADV)容量刷新、腺有关病毒(AAV)血清型筛选、特异性启动子优化、以在体利用为主题的CRISPR/Cas9技术综合开发以及其它的生物学钻研工具的研发。
病毒载体是实现基因递送、实现基因操作的关键环节,因而,对病毒载体的刷新在钻研和利用中有着特殊的沉要职位。优德88研发部针对病毒载体的刷新重要蕴含腺有关病毒的体内利用刷新,蕴含数十种靶向特异器官血清型、多种类型的AAV血清型文库、慢病毒和腺病毒的刷新。
此刻钻研中常用的rAAV就是利用AAV2型基因组与分歧的衣壳蛋白结合产生的混合体病毒载体,通常象征为rAAV2/N
(N为分歧的衣壳血清型)。沉组的病毒拥有AAV2型的不变表白和基因整合能力,同时获得了分歧血清型的组织习染嗜亲性(分歧血清型衣壳表表的特定结构位点决定了各自受体的特异性),阐发出肯定的器官靶向特异性。
分歧血清型AAV的组织嗜亲性
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血清型 |
组织亲和性 |
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rAAV2/1 |
神经系统(高滴度顺向跨突触),肌肉,骨骼肌,心肌,滑润肌 |
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rAAV2/2 |
神经系统,肌肉,肝脏,血管滑润肌,眼 |
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rAAV2/3 |
肌肉,肝脏,肺,眼 |
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rAAV2/4 |
神经系统,肌肉,眼,脑 |
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rAAV2/5 |
神经系统,肺,视网膜,肝脏,滑膜关节 |
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rAAV2/6 |
神经系统,肺,肌肉,心脏 |
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rAAV2/7 |
肌肉,肝脏 |
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rAAV2/8 |
神经系统,肝脏,胰腺,视网膜,脂肪组织 |
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rAAV2/9 |
神经系统,心肌,肺,视网膜,皮肤,肌肉,脂肪组织 |
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rAAV2-retro |
神经系统(逆向非跨突触) |
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AAV-PHP.eB |
跨血脑樊篱(静脉注射) |
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AAV-PHP.S |
全表周神经(尾静脉注射) |
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AAV-PAN |
胰腺(腹腔注射) |
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AAV-LUNG |
肺(尾静脉注射) |
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AAV-DJ |
视网膜,肺,肾脏,体表习染细胞 |
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AAV-7m8 |
视网膜 |
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AAV-ShH10Y |
视网膜Muller细胞 |
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AAV-Rh10 |
肝脏,血液,心脏,体表习染细胞 |
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AAV-Anc80L65 |
内耳、视网膜、骨骼肌、肝脏 |
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AAV-SCH9 |
SVZ区神经干细胞 |
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AAV-2M |
视网膜 |
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AAV-BR1 |
脑血管内皮细胞 |
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AAV6-TM6 |
幼胶质 |
靶向特异器官AAV血清型习染案例
1、rAAV2-retro:神经系统(逆向非跨突触)
注射部位:幼鼠BPN
注射方式:脑定位注射
载体:rAAV2-retro-hSyn-EYFP
观察功夫:4周
2、AAV-PHP.eB:神经系统全脑表白(跨血脑樊篱)
注射方式:尾静脉注射
载体:pAAV-CMV-mScarlet-3FLAG & pAAV-CMV-mNeonGreen-3FLAG
血清型:AAV-PHP.eB
病毒滴度:1.10×1013VG/mL & 2.35×1013 VG/mL
注射体积:200nl(注射病毒总量:1.5×1011 VG)
观察功夫:3周
3、AAV-PAN:特异性习染胰腺
4、AAV-LUNG:特异性习染肺部
注射方式:尾静脉注射
载体:pAAV-CMV-mScarlet-3FLAG
血清型:AAV-LUNG
注射量: 2x1011 VG /只(滴度:1.49 x1013 VG/mL),
注射体积:200 uL
观察功夫:3周
5、AAV-DJ体表习染293T细胞

AAV-DJ(MOI=10
5)
AAV8(MOI=10
5 )