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腺病毒AD

腺病毒ADV

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腺病毒（Adenovirus, ADV）是一种无包膜的线性双链DNA病毒，拥有宽泛的细胞和组织习染能力。习染过程剧烈，适于短功夫内进行基因高表白的尝试，与其它病毒相比，腺病毒优势在于插入片段较长，表白活性强。

  体表利用时，腺病毒载体转基因效能高（靠近100%的转导效能），且可转导分歧类型的细胞，对于大量难转染细胞的基因递送是一个很好的工具。但是，在体内利用时，由于腺病毒免疫原性强，习染剧烈，故；嵋鸲锊棵抛橹字⒎从澈突迕庖叻从，对动物体征和尝试了局的客观性造成影响。
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ADV包装和侵染过程

9bf620381dbb11df28080f0e6be4b8a4 腺病毒包装与纯化

  腺病毒包装骨架达质粒与穿梭质粒共转染HEK-293细胞，待细胞出现CPE状态后通过网络细胞上清和细胞裂解物，通过浓缩或氯化铯密度梯度离心纯化病毒。 
  CPE（Cytopathic Effect）：病毒对组织造就细胞侵染后产生的细胞变性，利用此种病变效应可进行病毒定量。
 

9bf620381dbb11df28080f0e6be4b8a4 腺病毒滴度检测

  检测步骤：酶联免疫法腺病毒滴度测定，凭据推算习染后染成褐色的阳性细胞数，来推算病毒滴度。
       尝试道理：腺病毒习染的阳性细胞表白的衣壳蛋白被染成褐色。
       检测步骤：免疫显色步骤
       尝试道理：通过抗5型腺病毒表壳蛋白的单抗与待习染腺病毒样品的细胞结合，再用HRP象征的二抗与一抗结合，经显色液显色，被习染的细胞造成褐色，凭据阳性细胞数，来推算病毒滴度。

9bf620381dbb11df28080f0e6be4b8a4 腺病毒载体优势

       ① 表白快，腺病毒习染细胞后，1-2天即可表白
       ② 载体容量大，习染效能高，常用于习染难习染的细胞
       ③ 不整合到染色体中，无插入致突变性
       ④  拥有嗜肝性，易于习染肝细胞，腺病毒的体内利用是用于习染肝脏
    不外由于腺病毒免疫原性高，对某些对表源刺激敏感的动物模型和组织中易造成炎症，体内利用需审慎。

分歧病毒的生物学个性比力
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载体选择
  优德88生物占有丰硕的腺病毒产品，用于操作编码基因和非编码基因，如lncRNA、microRNA、circRNA。
       以下腺病毒载体可供您选择：
调控方式 载体编号 载体名称（载体元件挨次） 真核抗性 荧光 启动子 默认标签 载体容量
过表白 H225 pADV-mCMV-MCS-3xFLAG N/A N/A mCMV 3FLAG >6kb
H201 pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG N/A EGFP mCMV 3FLAG >5kb
H213 pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP N/A EGFP mCMV 3FLAG >5kb
H221 pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP N/A EGFP mCMV 3FLAG >5kb
H204 pADV-mCMV-mCherry-HA N/A mCherry mCMV HA >5kb
H222 pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry N/A mCherry mCMV 3FLAG >5kb
H12588 pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG N/A mNeonGreen CMV 3FLAG >4kb
H12589 pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG N/A mScarlet CMV 3FLAG >4kb
circRNA过表白 H6946 pADV-CMV-S-circRNA N/A N/A CMV N/A >5kb
miRNA过表白 H216 pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
表白cre K0024  pADV-CMV-Cre N/A N/A CMV N/A N/A
滋扰 DKD001 pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
DKD004 pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry N/A mCherry U6 N/A N/A
CRISPR敲除 H5064 pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9 N/A N/A U6 3FLAG N/A
H9350 pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9 N/A sfGFP U6 3FLAG N/A
H5066 pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP N/A EGFP U6 N/A N/A
H218 pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9 N/A mCherry CMV 3FLAG N/A
H5449 pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1 N/A mCherry CMV 3FLAG N/A
  
 

9bf620381dbb11df28080f0e6be4b8a4 利用事俘

  1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝脏]
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  习染部位：肝脏
  
  载体名称：Ad-CBS
  
  注射方式：尾静脉
  
  注射量：1 x1011 PFU/mL，10ul
  
  检测功夫：7天
  
  2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝脏]
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  习染部位：肝脏
  
  载体名称：Ad-ATG7
  
  注射方式：尾静脉
  
  注射量：1 x109 PFU /只
  
  检测功夫：10天
  
  3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]
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  注射部位：大鼠大脑皮层
  
  载体名称：Ad-FBLN
  
  注射方式：脑立体定位注射
  
  注射量：三种分歧剂量
  
  检测功夫：7天
  
  优德88生物腺病毒的出产和质控采取了国际学术界公认的尺度流程，选取AdEasy及Admax腺病毒包装系统在HEK-293细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速密度梯度离心和过滤，并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定。通常情况下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml，齐全能够满足各类尝试的使用要求。

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