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CRISPR/Cas9

CRISPR/Cas9

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CRISPR/Cas9 是一种可能对基因组的特定位点进行精确编纂的技术 。其道理是核酸内切酶Cas9蛋白通过导向性RNA（guide RNA, gRNA）鉴别特定基因组位点并对双链DNA进行切割，造成DNA双链断裂，细胞利用非同源结尾衔接(Non homologous End Joining，NHEJ）或者同源沉组（Homologous Recombination, HR）方式对切割位点进行建复，实现DNA水平基因敲除或精确编纂 。
  CRISPR/Cas9 系统重要由两部门组成：
  1. 单链的guide RNA（single-guide RNA，sgRNA）
  2. 有核酸内切酶活性的Cas9 蛋白

9bf620381dbb11df28080f0e6be4b8a4 CRISPR基因敲除

  以基因敲除为主张时，能够利用Cas9-sgRNA对DNA进行切割产生双链断裂，随后细胞通过非同源结尾衔接方式建复DNA，在此过程中，将随机引入碱基的缺失或增长，基因发生移码突变，导致编码基因的敲除 。  

9bf620381dbb11df28080f0e6be4b8a4 CRISPR基因编纂  

  以基因敲入或代替为主张时，必要借助同源沉组道理 。CRISPR/Cas9系统中的Cas9-sgRNA在靶位点进行切割产生DNA双链断裂，在模板DNA存在时，细胞通过同源沉组方式建复DNA，而模板DNA能够被报答设计成必要插入的基因或必要建复的基因，此时细胞编码主张基因 。

9bf620381dbb11df28080f0e6be4b8a4 载体的选择（部门）

  提供病毒载体的含Cas9蛋白的单载和双载系统，可凭据主张基因序列设计多条gRNA，载体带有多种荧光抗性象征，方便筛选 。
载体类别 编号 载体元件
CRISPR慢病毒单载体 H5070

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
H7072

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-BSR-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
H6825

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
CRISPR慢病毒双载体 H5068

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE
H5450

pLenti-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-espCas9_1.1-WPRE
CRISPR  AAV单载体系统 H6941

pAAV-CMV-SaCas9-U6-sagRNA v2.0
H5273

pAAV-hSyn-SaCas9-U6-sagRNA v2.0
CRISPR  AAV双载体系统 H6291

pAAV-CMV-EGFP-WPRE-U6-spgRNA v2.0

H12663

pAAV-U6-shRNA/spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE

H11012

pAAV-CMV-Luc2-WPRE-U6-spgRNA

9bf620381dbb11df28080f0e6be4b8a4 病毒载体服务流程
 

  • 物种及主张基因名称
    病毒载体要求与选择
    其它特殊需要
  • Cas9病毒载体构建
    病毒包装与纯化
    滴度测定
  • 高滴度的病毒颗粒
    按合同提供对照病毒
    尝试汇报
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