在转录后建饰中 ，N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine, m6A）是mRNA和lncRNAs上最为普遍的建饰之一。目前发现microRNA ，circRNA, rRNA, tRNA和snoRNA上都有m6A建饰。m6A建饰重要发生在RRACH序列中的腺嘌呤上 ，其职能重要由Writer、Eraser和Reader决定。Writer即甲基转移酶 ，目前已知这个复合物的成分有METTL3 ，METTL14, METTL16, WTAP和KIAA1429等。而ALKBH5和FTO作为去甲基酶（Eraser）可逆转甲基化。目前发现m6A结合蛋白（Reader）有YTH结构域蛋白（YTHDF1, YTHDF2,YTHDF3,YTHDC1和YTHDC2）和核不均一蛋白HNRNP家族（HNRNPA2B1和 HNRNPC）。
MeRIP-seq则是钻研m6A建饰强有力的技术之一。MeRIP-seq是将MeDIP、RIP及RNA-seq技术结合起来 ，在全基因组领域内检测RNA甲基化。利用特异性的RNA甲基化抗体进行免疫共沉淀反映 ，将获得的甲基化建饰片段进行测序 ，同时 ，设计Input对照样本解除布景。
技术优势
携手RNA甲基化钻研国际驰名团队 ，深杜着化尝试与分析流程；
提炼数十篇顶级RNA甲基化文章思路 ，量身定造前沿尝试规划；
提供多组学整合分析与职能验证一站式服务 ，大幅缩短尝试周期；
一流的数据挖掘团队+丰硕的论文审稿经验 ，加快科研成就颁发。
样本肇始量与送样建议
|
样本类型 |
肇始量 |
|
细胞 |
>5x106 |
|
动物组织 |
>100 mg |
|
植物 |
>5 g |
当苦衷项：具体样本筹备指南 ，请联系在线客服。
分析内容
1. 测序序列统计与质控
2. 参考基因组比对：参考基因组比对Reads统计、参考基因组比对区域散布、测序数据比对散布
3. 全基因组Peak扫描：Peak calling、Peak注解
4. 差距Peak分析：差距Peak信息统计、差距Peak基因GO富集分析、差距Peak基因KEGG富集性分析
5. Motif分析
案例展示
客户案例1：m6A调控miRNA低级体鉴别加工
论文标题：N6-methyl-adenosine (m6A) marks primary microRNAs for processing
登载日期：2015年03月
颁发杂志：Nature
影响因子：40.1
钻研机构：美国洛克菲勒大学
在miRNA生物合成的第一步是在微处置蛋白复合物的援手下对低级microRNA（pri-miRNA）进行加工。微处置蛋白复合物由RNA结合蛋白DGCR8和III型核糖核酸酶Drosha组成。这个肇始事务必要DGCR8鉴别pri-miRNA发夹上茎和侧翼单链RNA的衔接处 ，并招募Drosha剪切双链RNA产生前体miRNA（pre-miRNA）。pri-miRNA的加工机造已经被阐释 ，但是目前并不知路DGCR8在众多拥有二级结构的转录本中鉴别和结合pri-miRNA的机造。
本钻研中 ，洛克菲勒大学Dr.Tavazoie教授发此刻哺乳动物细胞中 ，METTL3会使pri-miRNA发生甲基化 ，象征的pri-miRNA能够被DGCR8的鉴别和加工。通过miRNA芯片分析发现 ，敲低METTL3会降低DGCR8与pri-miRNA的结合作用 ，引起成熟体miRNA表白量降低 ，通过未经加工pri-miRNA含量增长。体表尝试证实m6A会推进pri-miRNA的加工。最后 ，职能验证尝试揭示METTL3可能促使miRNA成熟。所以m6A象征是一个关键的转录后建饰 ，会推进miRNA生物合成的肇始。
客户案例2：m6A鉴别酶HNRNPA2B1介导RNA加工
论文标题：HNRNPA2B1 Is a Mediator of m6A-Dependent Nuclear RNA Processing Events
登载日期：2015年09月
颁发杂志：Cell
影响因子：30.4
钻研机构：美国洛克菲勒大学
已知m6A是mRNA中最普遍的一种内部建饰方式之一。各类转录本如mRNA、lncRNA等上携带的m6A建饰可能影响RNA在细胞核中的“命运”如RNA降解以及转录后加工等。洛克菲勒大学Dr.Tavazoie教授在文中验证了一种RNA结合蛋白HNRNPA2B1可能特异性鉴别转录本上的m6A建饰。这些发生m6A建饰的位点地点的motif与甲基化转移酶METTL3 motif相匹配。此表HNRNPA2B1可能直接与发生m6A建饰的miRNA低级体（pri-miRNA）相结合 ，与miRNA微处置蛋白复合物之一DGCR8一路促使pri-miRNA成熟体的加工。
参考文件
1. Alarcón C R, Lee H, Goodarzi H, et al. N6-methyl-adenosine (m6A) marks primary microRNAs for processing[J]. Nature, 2015, 519(7544):482.
2. Alarcón C R, Goodarzi H, Lee H, et al. HNRNPA2B1 Is a Mediator of m(6)A-Dependent Nuclear RNA Processing Events.[J]. Cell, 2015, 162(6):1299-1308.
常见问题
1.样本处置有什么特殊的要求吗？
样本处置步骤凭据尝试室是否有液氮分为如下两种情况：
有液氮的情况：
组织样品离体后 ，急剧用RNase-free配造的生理盐水/PBS洗濯样本表表的污渍 ，并吸干表表的液体 ，迅速的将样本宰割成长宽高<=0.5cm的幼块（通常沉约100mg ，不外无需精准丈量 ，通常必要10个幼块左右） ，将样本放入已象征好名称且预冷好的Rnase-free的螺纹管中（不要将盖子拧死 ，以免从液氮中取出时分裂） ，迅速投入液氮中速冻>=1h ，而后取出置于-80℃保留 ，干冰运输。
没有液氮的情况：
提前筹备好RNase-free的1.5mL的EP管 ，向其中参与1mL的RNAfixer。
组织样品离体后 ，急剧用RNase-free生理盐水/PBS洗濯样本表表的污渍 ，并吸干表表的液体 ，迅速的将样本宰割成长宽高<=0.5cm ，约豌豆大幼的幼块（通常沉约100mg ，不外无需精准丈量 ，通常必要10个幼块左右） ，而后投入提前筹备好的1.5mL的EP管中 ，使样本齐全浸没在液体中 ，而后置于-80℃中保留 ，干冰运输。
把稳：尝试操作过程中请务必确保无RNA酶传染。
2.m6A检测步骤有哪些 ，只能用测序的步骤来检测吗？
定量步骤：LC-MS/MS、EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit（比色法）
高通量测序：m6A-seq（MeRIP-seq）、miCLIP-seq
定量步骤只能检测整体m6A水平 ，无单碱基分辨率；但是测序步骤令没有此限度。您能够凭据尝试的具体需要选择对应的检测步骤。
