TMT(Tandem Mass Tag)技术由美国Thermo Fisher Scientific开发的一种多肽体表象征技术。该技术选取了6标(TMTsixplex? Isobaric Label Reagent Set)、10标(TMT10plex? Isobaric Label Reagent Set )、16标(TMTpro 16plex)、18标(TMTpro 18plex)等同位素标签,通过与肽段特异氨基酸位点相连实现分歧起源的肽段象征,而后进行串联质谱分析,监测碎裂下来的标签实现肽段定量。一次尝试可矫捷比力最多18种分歧样本中蛋白质的相对含量。
TMT试剂重要由3部门组成:汇报基团、平衡基团和肽反映基团。以6标试剂为例:汇报基团相对分子质量别离为126、127、128、129、130和131;平衡基团相对分子质量别离为103、102、101、100、99和98,这样就形成了6种相对分子质量均为229的等量异位标签。汇报离子的强度就代表了相应样品中蛋白质/肽段的强度,实现了对分歧样本中蛋白质的定性和定量分析。
技术优势
1. 活络度高:低丰度蛋白也能检测出
2. 合用领域广:险些可对任何物种的各类蛋白质进行分离鉴定
3. 高通量:能同时对18组样本中蕴含的蛋白进行鉴定及表白差距分析
4. 高效:液相色谱与串联质谱连用,自动化操作,分析速度快,分离成效好
样本肇始量与送样建议
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样本类型 |
肇始量 |
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动物及临床脏器组织/脑组织等 |
>20mg |
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动物及临床皮肤/骨/血管/脂肪组织等 |
>100mg |
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植物叶片组织/花 |
>200mg |
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植物根/茎/果实/种子 |
>500mg |
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原代细胞/细胞系 |
>5×106个 |
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总RNA |
>100μg |
当苦衷项:具体样本筹备指南,请联系在线客服。
生物信息学分析内容
项目文章
Luo Z, Peng W, Xu Y, Xie Y, Liu Y, Lu H, Cao Y, Hu J. Exosomal OTULIN from M2 macrophages promotes the recovery of spinal cord injuries via stimulating Wnt/β-catenin pathway-mediated vascular regeneration. Acta Biomater. 2021 Dec;136:519-532. PMID: 34551329.
常见问题
1. iTRAQ及TMT等象征定量蛋白质组技术有什么特点?
iTRAQ以及TMT等象征定量蛋白质组技术分辨率高,细胞样品最多可鉴定超过6000个蛋白,并且绝大无数蛋白都有定量和定性信息;其次是通量高,能够一次最多实现8个(iTRAQ)或者10个(TMT)样品的尝试,出格适合于多组样品间的同时比力以及生物学过程的动态检测。
2. 没有全基因组数据的物种该若何进行蛋白的鉴定?
对于已经颁布全基因组序列的物种,能够在得到全序列后构建本地建库并进行本地检索;对于未进行全基因组测序的物种,能够选取近缘物种的数据库或者EST数据以及转录组数据进行检索。